Проведены исследования противовирусной активности препарата «Мирамистин» в отношении вирусов простого герпеса 1-го и 2-го типов в культуре клеток Vero-B. Использовали ВПГ 2-го антигенного типа, штамм «ВН», ВПГ 1-го типа, штамм «ЕС», полученные из лаборатории музейных штаммов ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН. В результате экспериментов установлено, что на модели герпесвирусной инфекции мирамистин обладает выраженным противовирусным эффектом. Противогерпетическая активность в отношении ВПГ находится в прямой зависимости от концентрации препарата. Оптимальными для предотвращения репродукции этих вирусов в клетках Vero-B следует считать концентрации мирамистина 50-500 мкг/мл (от 0,005 до 0,05%). Полученные результаты согласуются с ранее выявленной противовирусной активностью мирамистина в отношении других сложноустроенных вирусов и подтверждают роль суперкапсида в качестве главной мишени противовирусной активности мирамистина.

Study in vitro antiviral properties Myramistin ® for Herpes simplex virus types 1 and 2

Investigations of the antiviral drug activity miramistin against herpes simplex virus types 1 and 2, in cell culture Vero-B are conducted. Used HSV 2 antigen of the type, strain «VN», of viral HSV type 1, strain «EC», derived from laboratory strains of Museum Institute of Virology Academy of Medical Sciences. The experiments revealed that the model of herpes virus infection has a marked miramistin antiviral effect. Antiherpetic activity against HSV is directly dependent on the concentration of the drug. Optimal for preventing reproduction of these viruses in cells of Vero-B should be considered miramistin concentration of 50-500 ug / ml (from 0.005% to 0.05%). These results agree with the previously identified antiviral activity against other miramistin difficult arranged slozhnoustroennyh virus and confirm the role of superkapsida as the main target of antiviral activity miramistin.

Среди вирусных заболеваний герпетическая инфекция, обусловленная вирусами простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов, занимает одно из ведущих мест. У большинства здоровых людей ВПГ-1 и ВПГ-2 вызывают широкий спектр заболеваний, причем как острую первичную инфекцию, так и рецидивирующие заболевания кожи и слизистых оболочек. У новорожденных и лиц с иммунодефицитами инфекция может протекать особенно тяжело и заканчиваться летальным исходом.

Для профилактики и терапии ВПГ-инфекции предложено много средств, однако препаратами выбора остаются нуклеозидные аналоги (например, ацикловир), которые обладают селективной антигерпесвирусной активностью, обусловленной подавлением репликации вируса и инактивации вирусной ДНК-полимеразы. С 1982 года стали регистрироваться штаммы ВПГ, устойчивые к действию ацикловира (АЦВ), а за последние 10 лет, когда АЦВ стал основным противогерпетическим средством, частота выделения таких штаммов резко возросла, особенно от иммунокомпрометированных лиц [5].

По данным разных авторов, АЦВ-резистентные штаммы ВПГ встречаются в 4-14% случаев у онкологических больных, ВИЧ-инфицированных и лиц, перенесших трансплантацию органов и тканей или получающих длительную иммуносупрессивную терапию. В этой связи актуальной задачей является поиск и изучение новых противогерпетических средств с альтернативным механизмом противовирусного действия.

В литературе имеются данные о противовирусной активности препарата «Мирамистин». Оригинальный лекарственный препарат «Мирамистин» разработан в рамках программ по «Космической биотехнологии». Многогранные исследования свойств мирамистина были проведены в ведущих лабораториях России, Швеции и Германии. Препарат успешно прошел исследования в ведущих научных центрах и клиниках и др., среди которых НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского (Москва), Институт хирургии им. А.В. Вишневского РАМН (Москва), ММА им. Сеченова (Москва), НКЦ оториноларингологии МЗ РФ (Москва), Медицинская академия последипломного образования (Санкт-Петербург) и др.

Мирамистин относится к группе катионных поверхностно активных веществ, а именно к четвертичным аммониевым соединениям. Многочисленными научными и клиническими исследованиями доказана высокая активность мирамистина в отношении бактерий, грибов, вирусов и простейших, включая госпитальные полирезистентные штаммы и микробные ассоциации, также доказана способность мирамистина повышать местный иммунитет, усиливать процессы регенерации, при этом подтверждено отсутствие повреждающего действия на ткани человека.

Препарат обладает широким спектром антимикробного действия, включая госпитальные штаммы, резистентные к антибиотикам. Оказывает выраженное бактерицидное действие в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, аэробных и анаэробных бактерий, спорообразующих и аспорогенных бактерий, в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая госпитальные штаммы с полирезистентностью к антибиотикам.

Мирамистин оказывает противогрибковое действие на аскомицеты рода Aspergillus и рода Penicillium, дрожжевые грибы (Rhodotorula rubra, Torulopsis gabrata и т.д.) и дрожжеподобные (Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei и т.д.), дерматофиты (Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton verrucosum, Trichophyton schoenleini, Trichophyton violacent, Epidermophyton Kaufman-Wolf, Epidermophyton floccosum, Microsporum gypseum, Microsporum canis т.д.), а также на др. патогенные грибы, например, Pityrosporum orbiculare (Malassezia furfur), в виде монокультур и микробных ассоциаций, включая грибковую микрофлору с резистентностью к химиотерапевтическим препаратам.

Имеются данные о противовирусном действии мирамистина в отношении ретровирусов (ВИЧ), парамиксовирусов (кори, паротита) и некоторых других вирусов [1, 2]. Также обладает действием против простейших (хламидии, трихомонады и др.). Необходимо отметить, что мирамистин повышает чувствительность бактерий, грибов и простейших к действию антибиотиков. Синергизм действия мирамистина с антибиотиками и другими препаратами позволяет сократить длительность лечения и значительно повысить эффективность терапии. Препарат обладает избирательностью действия, т.е. эффективно действует на патогенные микроорганизмы, не оказывая при этом отрицательного действия на ткани организма человека. Кроме того препарат обладает рядом других эффектов, а именно:

— повышает местный иммунитет, стимулируя защитные реакции в месте применения, за счет активации поглотительной и переваривающей функции фагоцитов;

— потенцирует активность моноцитарно-макрофагальной системы, нормализуя транспортную функцию мерцательного эпителия (мукоциллярный клиренс);

— усиливает процессы регенерации, стимулируя эпителизацию и репаративные процессы в ране, что ускоряет заживление;

— обладает противовоспалительным действием за счет активизации процесса фибринолиза в очаге воспаления.

При этом препарат не всасывается и не оказывает повреждающего действия на слизистые оболочки и кожные покровы, не обладает местно-раздражающим и аллергизирующим действием.

Обнаружено, что мирамистин проявляет активность на ранних этапах инфекционного процесса, в основе его действия лежит предотвращение адсорбции и пенетрации вируса в клетки хозяина. Учитывая, что механизм противовирусного действия мирамистина отличается от действия АЦВ, можно предположить, что использование мирамистина для профилактики и комплексной терапии ГИ позволило бы снизить не только частоту появления штаммов ВПГ, резистентных к действию ацикловира и его аналогов, но и снизить распространенность вируса среди лиц групп риска, а также повысить эффективность противогерпетического лечения.

Целью исследования было изучение in vitro противовирусной активности мирамистина на модели экспериментальной герпесвирусной инфекции, обусловленной ВПГ 1-го и 2-го антигенного типов, в культуре клеток Vero-B.

Материалы и методы

Вирусы. Использовали ВПГ 2-го антигенного типа, штамм «ВН» и ВПГ 1-го типа, штамм «ЕС», полученные из лаборатории музейных штаммов ГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН». Указанные вирусы после трех пассажей и титрования на культуре клеток Vero-B хранили при минус 70°С. Титр вируса определяли по Риду и Менчу и выражали в ТЦД₅₀/мл. Титр ВПГ-2 составил 5,0 ТЦД₅₀/мл, ВПГ-1 — 5,25 ТЦД₅₀/мл. Для заражения использовали вирус в дозе 10-100 ТЦД₅₀/лунку.

Культура клеток. Испытание противовирусной активности препарата «Мирамистин» проводили на монослойной перевиваемой культуре клеток почек зеленых мартышек Vero-B, полученной из коллекции культур тканей НИИ вирусологии РАМН. Клетки культивировали в ростовой среде Игла (производства НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН) с добавлением 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС, Gibco), 2 мМ L-глутамина (Sigma, США) и антибиотиков (100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина). Поддерживающая среда отличалась тем, что в нее вносили 2% ЭТС. Клетки выращивали в 96-луночных планшетах (Costar, GB) при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% СO₂; посевная доза — 500 тыс. клеток/мл или 50 тыс. клеток/лунку (в объеме 100 мкл).

Препараты. Препарат Мирамистин^Ò предоставлен ЗАО «Инфамед» (Москва) в виде стерильного 1%-го раствора (рН 6,8). В опытах использовали стерильные растворы препарата в диапазоне концентрации от 0,1 до 0,0005% (5-1000 мкг/мл). Препарат до нужной концентрации разводили питательной средой Игла, не содержащей сыворотки.

В качестве препарата сравнения использовали коммерческий препарат «Зовиракс» (Zovirax, GlaxoWellcome, Smith Kline Beechem, Великобритания). Его разводили согласно инструкции в стерильной дистиллированной воде до концентрации 1 мг/мл и хранили при минус 20°С. Перед проведением эксперимента маточный раствор выдерживали при комнатной температуре и асептически готовили рабочие концентрации (от 1000 мкг/мл до 0,02 мкг/мл).

Дизайн исследования. После полного формирования в лунках планшета монослоя клеток Vero-B (в течение 24 ч.) ростовую среду удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки в составе поддерживающей среды мирамистин (в максимально переносимых и меньших концентрациях) по одной из нижеприведенных схем. Противовирусную активность препаратов (ПАП) оценивали общепринятыми методами по их способности предотвращать развитие индуцируемого вирусами цитопатического действия (ЦПД) и ингибировать репродукцию вирусов в культуре клеток, а также по наличию вирулицидного действия [7, 8].

Для профилактики герпесвирусной инфекции широко применяются вирулицидные препараты, оказывающие непосредственное разрушающее действие на вирусные частицы (например, оксолиновая мазь). Оценку вирулицидного действия проводили для того, чтобы выяснить, посредством какого механизма мирамистин проявляет свою активность в отношении вируса простого герпеса: ингибиции репродукции вируса или в результате разрушения или повреждения им вирусных частиц.

Схема 1. «Оценка цитотоксического действия препарата на неинфицированные клетки»: различные концентрации препарата вводили в состав поддерживающей среды, которой покрывали сформировавшийся монослой. Планшеты инкубировали в течение 96 ч., как указано выше. Действие препарата оценивали ежедневно методом световой микроскопии по степени изменения морфологии клеточного монослоя.

Определяли ЦТД₅₀ препарата, которая соответствовала концентрации, вызывающей видимые нарушения морфологии у 50% клеток монослоя и максимально переносимую концентрацию (МПК) — наиболее высокую дозу препарата, не вызывающую видимых изменений клеточного монослоя, по сравнению с контролем. Для дальнейшего исследования применяли концентрации препаратов, не превышающие МПК.

Схема 2. «Определение прямого вирулицидного действия препарата на вирионы ВПГ»: проводили в течение 1 ч. инкубирование суспензии вируса ВПГ-2 или ВПГ-1 в присутствии различных концентраций препарата в среде Игла при 37 °С в атмосфере с 5% СO₂ с последующим титрованием суспензии в культуре клеток. Инокулюмы из серийных разведений (10^-1–10^-6), вносили в лунки планшета с монослоем, планшеты инкубировали 1 ч при 37°С в атмосфере с 5% СO₂, затем суспензию вируса удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки свежую питательную среду, после чего планшеты инкубировали 96 ч в тех же условиях.

Схема 3. «Оценка ранней профилактической активности»: внесение препарата за 1 ч. до инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили питательную среду, содержащую мирамистин в указанных концентрациях и инкубировали, как описано выше. Через 1 ч. в лунки планшета вносили суспензию вируса и инкубировали в течение 1 ч. Затем суспензию вируса удаляли, в лунки вносили питательную среду, не содержащую препарат, и планшеты инкубировали, как описано выше, в течение 96 ч.

Схема 4. «Оценка экстренно-профилактической активности»: внесение препарата за 1 ч. до/ и через 1 ч. после инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили питательную среду, содержащую мирамистин в указанных концентрациях, затем клетки инкубировали в указанных выше условиях. Через 1 ч. в лунки планшета вносили суспензию вируса и инкубировали еще 1 ч. Затем среду с не связавшимися вирусами удаляли и вносили в лунки питательную среду, содержащую препарат в тех же концентрациях. Через 15 мин. действие препарата останавливали внесением в каждую лунку по 100 мкл ЭТС, планшеты помещали в термостат и выдерживали в тех же условиях в течение 96 ч.

Схема 5. «Оценка поздней профилактической активности»: внесение препарата через 1 ч. после инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили суспензию вируса и инкубировали в течение 1 ч. Затем суспензию вируса удаляли и вносили в лунки питательную среду, содержащую препарат в указанных концентрациях. Через 15 мин. действие препарата останавливали внесением в каждую лунку по 100 мкл ЭТС, планшеты помещали в термостат и выдерживали в течение 96 ч. в указанных выше условиях.

Оценку вирус-индуцированного ЦПД и противовирусной активности препаратов в культуре клеток проводили ежедневно при световой микроскопии по степени изменения морфологии клеточного монослоя [7]. Учет результатов проводили при наличии 100% ЦПД в лунках с контролем вируса — через 72-96 ч. от момента инфицирования (в случае ВПГ-1 или ВПГ-2 соответственно).

С целью изучения влияния различных концентраций мирамистина на репродукцию вируса на 3–4-е сутки после инфицирования отбирали соответствующие пробы вируса и определяли его остаточную инфекционность. Пробы отбирали в микропробирки с крышкой (Eppendorf) и сохраняли при минус 70°С. Перед постановкой опыта пробы подвергали троекратному замораживанию-оттаиванию. Затем клеточный дебрис удаляли центрифугированием, готовили серийные 10-кратные разведения проб, которыми в дальнейшем инфицировали отмытый монослой клеток Vero-B. Планшеты инкубировали 1 ч., затем суспензию вируса удаляли, трехкратно отмывали клетки от не связавшегося вируса и вносили в лунки свежую питательную среду. Планшеты выдерживали в течение 96 ч. в указанных ранее условиях. Результаты титрования оценивали по общепринятой методике.

Противовирусную активность препарата оценивали по 50%-ной ингибиторной концентрации (ИК₅₀), т.е. минимальной концентрации препарата, при которой ЦПД вируса уменьшалось наполовину по сравнению с контролем.

Статистическую обработку результатов исследования проводили методом вариационной статистики с использованием прикладных программ Excel-5.0. Достоверность разности полученных результатов оценивали с помощью критерия t Стьюдента, различия признавали достоверными при p<0,05 [3, 4].

Результаты и обсуждение

Вначале в серии экспериментов изучено цитотоксическое действие мирамистина (по схеме 1 в диапазоне концентраций 5-1000 мкг/мл) на перевиваемую линию клеток Vero-B. Установлено, что степень выраженности цитотоксического эффекта зависит от использованной концентрации мирамистина. Так, в концентрации 1000 мкг/мл препарат вызывает практически полную гибель клеток через 24 ч. после контакта с ними, а в концентрации 500 мкг/мл вызывает изменение у 50% клеток монослоя (ЦТД₅₀). МПК мирамистина для клеток Vero-B составила 100 мкг/мл. По данным теста с трипановым синим, процент жизнеспособных клеток через 96 ч. инкубировання в присутствии 5-100 мкг/мл мирамистина практически не отличался от такового в контроле. Показатель ЦТД₅₀ зовиракса составил 750 мкг/мл, МПК — 500 мкг/мл.

Изучение активности мирамистина по схеме 2 в концентрациях 5-5000 мкг/мл показало, что препарат проявляет прямое дозозависимое вирулицидное действие в отношении ВПГ-2 и ВПГ-1 (табл. 1).

Таблица 1.

Определение прямого вирулицидного действия мирамистина на вирионы ВПГ-1 и ВПГ-2

Доза мирамистина, мкг/мл	Вирус простого герпеса 2-го типа, шт. ВН		Вирус простого герпеса 1-го типа, шт. ЕС
	Титр вируса, lg ТЦД50/мл	Снижение титра относительно контроля, lg ТЦД50/мл	Титр вируса, lg ТЦД50/мл	Снижение титра относительно контроля, lg ТЦД50/мл
100–500	0*	5,00	0	5,25
50	0	5,00	1,00	4,25
25	4,00	1,00	3,00	2,25
12	4,25	0,75**	3,00	2,25
6	5,00	0	5,25	0
0 (контроль)	5,00	–	5,25	–

Примечание: * менее 0,25 lg ТЦД₅₀/мл; ** различия с контролем статистически недостоверны (p>0,05)

Как видно из данных, представленных в таблице 1, вирулицидное действие мирамистина в отношении вирионов ВПГ-2 было немного активнее. Так, в концентрации 50 мкг/мл препарат способствовал уменьшению количества жизнеспособных вирионов ВПГ-1 более чем в 10 000 раз и при этом инактивировал все вирионы ВПГ-2.

Изучение профилактического эффекта применения мирамистина на модели инфекции, вызванной ВПГ-2 и ВПГ-1 в культуре клеток Vero-B, позволило установить следующее.

Таблица 2.

Оценка профилактического действия мирамистина на вирионы ВПГ-1 и ВПГ-2 in vitro при заражении культуры ткани Vero-B

Доза мирамистина, мкг/мл	Титры герпесвируса (lg ТЦД50/мл) после профилактического применения мирамистина по разным схемам
	Схема 3		Схема 4		Схема 5
	ВПГ-2	ВПГ-1	ВПГ-2	ВПГ-1	ВПГ-2	ВПГ-1
100-500	0*	0	0	0	0	0
50	0	5,00**	0	0	0	4,00
25	3,25	5,25	0	5,25	4,00	5,25
12	3,25	5,25	4,00	5,25	4,00	5,25
6	5,00	5,25	5,00	5,25	4,75**	5,25
0 (контроль)	5,00	5,25	5,00	5,25	5,00	5,25

Примечание: * менее 0,25 lg ТЦД₅₀/мл; ** различия с контролем статистически недостоверны (p>0,05)

Мирамистин в концентрациях 100-500 мкг/мл проявлял высокую профилактическую активность, которая не зависела от типа вируса простого герпеса или схемы применения препарата. При концентрациях 12-50 мкг/мл противовирусный эффект зависел от дозы препарата и в целом был более выражен в отношении ВПГ-2. Так, по схеме 4 (экстренно-профилактической) полная инактивация ВПГ-2 отмечалась при концентрации мирамистина 25 мкг/мл (по схемам 3 и 5 — при концентрации 50 мкг/мл). Полная инактивация ВПГ-1 по схеме 4 отмечена при концентрации 50 мкг/мл, по двум другим схемам — 100 мкг/мл или выше. В присутствии 12-25 мкг/мл мирамистина, применяемого по схемам 3 или 5, инфекционность ВПГ-2 снижалась в 10-56 раз (что соответствует снижению титра вируса на 1,00-1,75 lg). Вместе с тем эффективность мирамистина при внесении в культуру ткани была существенно ниже, чем та, которая выявлена при оценке прямого вирулицидного действия препарата на ВПГ-1, но не на ВПГ-2. По-видимому, это связано с различиями в динамике взаимодействия использованных штаммов вирусов с клетками данной линии. Так, при концентрации 50 мкг/мл мирамистина, применяемого по схеме 3, титр ВПГ-1 составил 5 lg ТЦД₅₀/мл (при оценке вирулицидного действия — 1 lg ТЦД₅₀/мл). Из полученных данных следует, что по противогерпетической эффективности в отношении ВПГ-2 использованные схемы применения мирамистина можно расположить так: схема 4 > схема 3 > схема 5, а в отношении ВПГ-1 — схема 4 > схема 5 > схема 3.

Препарат сравнения (зовиракс) в широком диапазоне концентраций обеспечивал полное блокирование ЦПД вируса в течение 96-часового периода наблюдения не только при низкой, но и при высокой множественности инфицирования. Следует отметить, что при внесении на ранних этапах после заражения (через 1 час после адсорбции вируса) этот препарат с высокой степенью достоверности снижал инфекционность испытанных вирусов (табл. 3). Эффективность его действия по мере снижения концентрации плавно снижалась. МПД50 препарата по отношению к ВПГ-2 составляет 0,2 мкг/мл, по отношению к ВПГ-1 — 0,7 мкг/мл.

Таблица 3.

Эффективность препарата «Зовиракс» в отношении вируса ВПГ-1 и ВПГ-2 при использовании по схеме 5 (через 1 час после инфицирования клеток Vero-B).

Доза зовиракса, мкг/мл	Вирус простого герпеса 2-го типа, шт. ВН		Вирус простого герпеса 1-го типа, шт. ЕС
	Титр вируса, lg ТЦД50/мл	Снижение титра относительно контроля, lg ТЦД50/мл	Титр вируса, lg ТЦД50/мл	Снижение титра относительно контроля, lg ТЦД50/мл
62,5	1,50	3,50	1,50	4,00
31,5	1,50	3,50	1,50	4,00
15,0	2,00	3,00	2,00	3,50
7,5	2,00	3,00	2,00	3,50
3,5	2,00	3,00	2,50	3,00
1,5	2,50	2,50	2,50	3,00
0,75	3,00	2,00	3,00	2,50
0,35	3,50	1,50	3,50	2,00
0,15	3,75	1,25	4,50	1,00
0,07	4,25	0,75	Н.и.	–
0 (контроль)	5,00	–	5,50	–

Примечание: Н.и. — не исследовали.

Из представленных следует, что в экспериментах in vitro на модели герпесвирусной инфекции в культуре чувствительных клеток Vero-B, обусловленной ВПГ-1 (штамм «ЕС») и ВПГ-2 (штамм «ВН»), что мирамистин обладает выраженным противовирусным эффектом. Противогерпетическая активность в отношении ВПГ находится в прямой зависимости от концентрации препарата. Оптимальными для предотвращения репродукции этих вирусов в клетках Vero-B следует считать концентрации мирамистина 50-500 мкг/мл (от 0,005% до 0, 05%). Полученные результаты согласуются с ранее выявленной противовирусной активностью мирамистина в отношении других сложноустроенных вирусов [1] и подтверждают роль суперкапсида как главной мишени противовирусной активности этого препарата. В наших исследованиях выявлена вирулицидная активность препарата в отношении как ВПГ-1, так и ВПГ-2.

При использовании разных профилактических схем обработки препарат обладал выраженной противовирусной активностью в отношении ВПГ-2 и менее выраженной активностью — в отношении ВПГ-1. Для выяснения отличий в действии мирамистина на ВПГ-1, шт. ЕС, требуется проведение дополнительных исследований с использованием других штаммов ВПГ-1. В целом полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности использования мирамистина в комплексной терапии герпетической инфекции.

Выводы:

1. Мирамистин обладает выраженной противовирусной активностью в отношении вируса простого герпеса, проявляет вирулицидные свойства и обладает способностью тормозить репликацию вирусов в инфицированных культурах клеток, что приводит к существенному снижению титров инфекционной активности ВПГ.

2. При использовании разных профилактических схем обработки препарат проявляет выраженную противовирусную активность в отношении ВПГ-2 и менее выраженную — в отношении ВПГ-1.

3. Противогерпетическая активность мирамистина в отношении ВПГ находится в прямой зависимости от концентрации препарата.

 

И.М. Кириченко, И.Ф. Баринский, Л.М. Алимбарова

ЗАО «ИНФАМЕД», Москва

НИИ вирусологии имени Д.И. Ивановского РАМН

И.М. Кириченко — руководитель отдела научных исследований и регистрации лекарственных средств ЗАО «ИНФАМЕД»

 

Литература:

1. Изучение in vitro антивирусных свойств Мирамистина^® в отношении вирусов кори и паротита // А.П. Агафонов, М.О. Скарнович, В.А. Петрищенко и соавт. Антибиотики и химиотерапия, 2005. — Вып. 50. — № 5-6. — С. 17-19.

2. Криворутченко Ю.Л. Дозозависимая инактивация мирамистином внеклеточного вируса иммунодефицита человека // Вопр. вирусол., 1998. — № 3. — С. 122-124.

3. Ларкин Г.Ф. В кн.: Биометрия. — М., 1980. — С. 106-107.

4. Пшеничников В.А., Семенов Б.Ф., Зезеров Е.Г. Стандартизация методов вирусологических исследований. — М., 1974. — С. 123-126.

5. Bacon Т.Н., Levin M.J., Leary J.J., Sarisky R.T. and Sutton D. Herpes simplex virus resistance to acyclovir and penciclovir after two decades of antiviral therapy. Clinical Microbiology Reviews, 2003. — V. 16. — № l. — P. 114-128.

6. Cotarelo M., Catalan P., Sanchez-Carrillo C., Menasalvas A., Cercenado E. et al. Cytopathic effect inhibition assay for determining the in vitro susceptibility of herpes simplex virus to antiviral agents. J. Antimicrob. Chemother., 1999. — V. 44. — P. 705-708.

7. De Clerg E., Descamhs J., Verkelst G. et al. J. Inf. Dis., 1980. — V. 141. — № 5. — P. 563-574.

8. Kruppenbacher J.P., Klass R. and Eggers H.J. A rapid and reliable assay for testing acyclovir sensitivity of clinical herpes simplex virus isolates independent of virus dose and reading time. Antiviral Res., 1994. — V. 23. — P. 11-22.